Plasmide CRISPR d'Activation (h) BPTF: sc-404092-ACT

BPTF (bromodomain PHD finger transcription factor) code un composant régulateur central du complexe de remodelage de la chromatine NURF, dépendant de l’ATP, qui interprète les marques histoniques et module le positionnement des nucléosomes afin de contrôler des programmes transcriptionnels. En couplant un bromodomaine et un doigt PHD à l’activité de remodelage de la chromatine, BPTF influence la fonction des enhancers, l’accessibilité des promoteurs et l’expression génique spécifique de lignée au cours du développement et de la différenciation cellulaire. La régulation dépendante de BPTF s’articule avec des voies impliquées dans la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et l’organisation de la chromatine, ce qui en fait une cible fréquente des études sur le contrôle épigénétique. Une expression ou une activité dérégulée de BPTF a été associée à des états transcriptionnels altérés observés dans de multiples contextes pathologiques, notamment des cancers et des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui étaye sa pertinence en tant que nœud mécanistique dans les pathologies pilotées par la chromatine.

BPTF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BPTF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BPTF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BPTF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BPTF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BPTF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BPTF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BPTF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BPTF dans les cellules tumorales présentant une expression de BPTF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.