BPI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404909

Übersicht

BPI (bakterizides/permeabilitätssteigerndes Protein) ist ein Granulaprotein neutrophiler Granulozyten und ein Faktor der mukosalen angeborenen Immunität mit hoher Affinität zu Lipopolysaccharid (LPS) auf gramnegativen Bakterien. Dort neutralisiert es die Endotoxinaktivität und fördert das Abtöten von Bakterien, indem es die Integrität der äußeren Membran stört. Durch Bindung an LPS und die Modulation von Interaktionen mit dem LPS-bindenden Protein sowie den CD14/TLR4-Signalwegkomponenten kann BPI nachgeschaltete Entzündungsreaktionen und die Zytokinproduktion beeinflussen. Die Expression und Aktivität von BPI werden häufig im Kontext von Wirt-Pathogen-Interaktionen, neutrophiler Degranulation und Barriereabwehr untersucht. Eine dysregulierte LPS-Handhabung und veränderte BPI-Spiegel wurden bei entzündlichen Erkrankungen der Atemwege und des Gastrointestinaltrakts, in der Sepsisbiologie sowie in Bezug auf die Anfälligkeit für gramnegative Infektionen untersucht.

Das BPI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BPI-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BPI-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BPI nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die BPI-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BPI-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der BPI-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BPI-Exone abzielen, die für die BPI-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BPI-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom BPI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom BPI CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BPI-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das BPI HDR-Plasmid (h) und BPI HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BPI-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BPI-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.