Plasmide CRISPR d'Activation (h) BORIS: sc-403313-ACT

CTCFL code BORIS (« Brother of the Regulator of Imprinted Sites »), une protéine de liaison à l’ADN de type cancer‑testis, apparentée à CTCF, qui reconnaît des séquences de type isolateur et remodèle l’architecture de la chromatine. BORIS participe à la régulation épigénétique de la transcription en modulant l’activité des promoteurs et des enhancers, les états de méthylation de l’ADN et l’organisation du génome à grande échelle, influençant des processus tels que l’expression des gènes de la lignée germinale, les programmes de destin cellulaire et l’accessibilité de la chromatine. Une expression aberrante de BORIS est associée à une reprogrammation transcriptionnelle et à une expression déréglée de réseaux germinaux et oncogéniques normalement silencieux, ce qui en fait une cible utile pour étudier la plasticité épigénétique et les mécanismes de contrôle transcriptionnel dans les cellules humaines.

BORIS Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CTCFL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BORIS Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CTCFL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CTCFL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BORIS. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CTCFL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BORIS au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BORIS dans les cellules tumorales présentant une expression de CTCFL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.