Bob 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400771-ACT

POU2AF1 (Bob 1/OBF-1) codifica um coativador transcricional restrito a células B que atua em parceria com OCT1 (POU2F1) e OCT2 (POU2F2) para potencializar a transcrição dependente de octâmeros. Bob 1 sustenta a formação do centro germinativo, a regulação de genes de imunoglobulina e programas mais amplos de ativação de células B ao modular a atividade de promotores e enhancers em conjunto com fatores de transcrição definidores de linhagem. Por meio dessas redes, POU2AF1 contribui para estados de diferenciação e sinalização característicos de células B maduras, influenciando respostas dirigidas por antígenos e o desenvolvimento de plasmócitos. A expressão desregulada de POU2AF1 e o circuito transcricional associado são frequentemente estudados no contexto de neoplasias de células B e disfunções imunes, para compreender programas alterados de regulação gênica.

Bob 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de POU2AF1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Bob 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus POU2AF1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição POU2AF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Bob 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus POU2AF1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Bob 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Bob 1 em células tumorais com expressão de POU2AF1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.