BMP-9 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402887-NIC

O fator de diferenciação do crescimento 2 (GDF2), que codifica a proteína morfogenética óssea 9 (BMP-9), é um ligante circulante da superfamília TGF-β que sinaliza predominantemente através dos receptores do tipo I ALK1/ACVRL1 e ALK2, em conjunto com o BMPR2, ativando programas transcricionais mediados por SMAD1/5/9. Em contextos endoteliais e mesenquimais humanos, a BMP-9 ajuda a regular a quiescência vascular, o remodelamento angiogênico e a expressão gênica associada à diferenciação, com comunicação cruzada (“cross-talk”) com as vias de sinalização MAPK e PI3K influenciando as respostas do estado celular. A desregulação da sinalização BMP-9/ALK1 está intimamente ligada à patobiologia vascular, incluindo a telangiectasia hemorrágica hereditária e a hipertensão arterial pulmonar, e a atividade alterada da BMP-9 tem sido estudada em fibrose, inflamação e biologia do microambiente tumoral. Por ser uma via dirigida por ligante, a BMP-9 também oferece um eixo tratável para investigar a especificidade receptor-ligante e a transcrição a jusante dependente de SMAD em sistemas celulares primários e engenheirados relevantes.

BMP-9 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GDF2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GDF2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GDF2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GDF2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.