BMP-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401979-ACT

O BMP6 humano codifica a proteína morfogenética óssea 6 (BMP-6), um ligante secretado da superfamília TGF-β que sinaliza por meio de receptores BMP do tipo I/II para ativar SMAD1/5/8 e programas transcricionais que controlam a diferenciação osteogênica, a remodelação da matriz extracelular e o estabelecimento de padrões no desenvolvimento. A BMP-6 também interage com vias de sinalização relacionadas a MAPK e PI3K para influenciar decisões de destino celular e a homeostase tecidual de maneira dependente do contexto. No fígado, a BMP-6 é um importante regulador a montante do metabolismo do ferro por meio da indução da hepcidina (HAMP), conectando a sinalização BMP/SMAD ao equilíbrio sistêmico do ferro. A atividade desregulada da via BMP6 tem sido associada a alterações na biologia óssea, a processos relacionados à fibrose e a fenótipos de homeostase do ferro, o que a torna relevante para estudos mecanísticos de sinalização BMP e regulação metabólica.

BMP-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BMP6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BMP-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BMP6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BMP6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BMP-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BMP6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BMP-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BMP-6 em células tumorais com expressão de BMP6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.