Plasmide CRISPR d'Activation (h) BMP-6: sc-401979-ACT

Le gène humain BMP6 code la protéine morphogénétique osseuse 6 (BMP-6), un ligand sécrété de la superfamille du TGF-β qui transmet des signaux via les récepteurs BMP de type I/II afin d’activer SMAD1/5/8 et des programmes transcriptionnels contrôlant la différenciation ostéogénique, le remodelage de la matrice extracellulaire et la mise en place des patrons développementaux. BMP-6 interagit également avec des voies de signalisation liées aux MAPK et à la PI3K pour influencer, de manière dépendante du contexte, les décisions de destinée cellulaire et l’homéostasie tissulaire. Dans le foie, BMP-6 est un régulateur amont majeur du métabolisme du fer via l’induction de l’hepcidine (HAMP), reliant la signalisation BMP/SMAD à l’équilibre systémique du fer. Une activité dérégulée de la voie BMP6 a été associée à des altérations de la biologie osseuse, à des processus liés à la fibrose et à des phénotypes touchant l’homéostasie du fer, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la signalisation BMP et de la régulation métabolique.

BMP-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BMP6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BMP-6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BMP6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BMP6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BMP-6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BMP6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BMP-6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BMP-6 dans les cellules tumorales présentant une expression de BMP6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.