Plasmide CRISPR d'Activation (m2) BMP-3: sc-430986-ACT-2

Le gène murin Bmp3 code la protéine morphogénétique osseuse 3 (BMP-3), un ligand sécrété de la superfamille du TGF-β qui module l’ostéogenèse et l’organisation du squelette en influençant la signalisation dépendante des SMAD et en antagonisant les voies BMP ostéoinductrices. BMP-3 est produite par les compartiments osseux et stromaux et contribue à la régulation de la formation osseuse, du dépôt de matrice extracellulaire et de la différenciation des cellules de la lignée mésenchymateuse, ce qui l’inscrit dans des programmes plus larges d’homéostasie du cartilage et de l’os. Des altérations de l’activité de Bmp3/BMP-3 ont été associées à des phénotypes liés à une faible masse osseuse, à une réparation des fractures déficiente et à un développement cranio-facial anormal, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans des modèles de maladies musculo-squelettiques. L’édition génomique ou la perturbation de Bmp3 dans des systèmes murins permet d’interroger les interactions au sein du réseau TGF-β/BMP, l’engagement de lignée et le remodelage tissulaire en biologie du développement et en recherche en biologie squelettique.

BMP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Bmp3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BMP-3 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Bmp3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Bmp3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BMP-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Bmp3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BMP-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BMP-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Bmp3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.