BMP-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-430986-ACT-2

O gene Bmp3 de camundongo codifica a proteína morfogenética óssea 3 (BMP-3), um ligante secretado da superfamília TGF-β que modula a osteogênese e o padrão de formação do esqueleto ao influenciar a sinalização dependente de SMAD e antagonizar vias de BMP com efeito osteoindutor. A BMP-3 é produzida por compartimentos ósseos e estromais e contribui para a regulação da formação óssea, da deposição de matriz extracelular e da diferenciação de células da linhagem mesenquimal, o que a vincula a programas mais amplos de homeostase da cartilagem e do osso. Alterações na atividade de Bmp3/BMP-3 têm sido associadas a fenótipos relacionados a baixa massa óssea, reparo de fraturas prejudicado e desenvolvimento craniofacial anormal, sustentando seu uso como um nó mecanístico em modelos de doenças musculoesqueléticas. A edição gênica ou a perturbação de Bmp3 em sistemas murinos permite investigar a comunicação cruzada entre redes de TGF-β/BMP, o comprometimento de linhagem e o remodelamento tecidual em pesquisas de biologia do desenvolvimento e biologia esquelética.

BMP-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Bmp3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BMP-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Bmp3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Bmp3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BMP-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Bmp3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BMP-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BMP-3 em células tumorais com expressão de Bmp3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.