BMP-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400514-ACT

BMP2 kodiert das bone morphogenetic protein 2 (BMP-2), einen sezernierten Liganden der TGF-β-Superfamilie, der über Serin/Threonin-Kinase-Rezeptoren vom Typ I/II signalisiert und dabei sowohl die kanonischen SMAD1/5/8- als auch nicht-kanonische MAPK-Signalwege aktiviert. BMP-2 reguliert die osteogene und chondrogene Differenzierung, den Umbau der extrazellulären Matrix und Musterbildungsprozesse während der Entwicklung und integriert sich dabei in RUNX2- und WNT-assoziierte Genprogramme. Eine fehlregulierte BMP2-Signalisierung wird mit Störungen der Knochenbildung und -reparatur, heterotoper Ossifikation sowie dem Remodeling des tumorassoziierten Mikroumfelds in Verbindung gebracht. Als Knotenpunkt in menschlichen Signalwegen wird BMP-2 häufig im Kontext der Festlegung mesenchymaler Zelllinien, der Stammzellbiologie und des Signalweg-Crosstalks untersucht, der die Gewebehomöostase prägt.

BMP-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BMP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BMP-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BMP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BMP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BMP-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BMP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BMP-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BMP-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BMP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.