BMP-10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404729-ACT

O BMP10 humano codifica a proteína morfogenética óssea 10 (BMP-10), um ligante secretado da superfamília TGF-β que sinaliza por meio de receptores quinase de serina/treonina dos tipos I/II para ativar programas transcricionais dependentes de SMAD. A BMP-10 está implicada na cardiogênese e na homeostase vascular, influenciando a diferenciação e a proliferação celulares, bem como a remodelação da matriz extracelular, por meio da regulação da via BMP/SMAD. A desregulação da sinalização de BMP10 tem sido associada a fenótipos cardiovasculares e a alterações no comportamento de células endoteliais e de músculo cardíaco, tornando-a relevante para estudos de sinalização do desenvolvimento e de remodelação associada a doenças. In vitro, a BMP-10 oferece um ponto de intervenção acessível para investigar o crosstalk da via com outros ligantes da família TGF-β e respostas transcricionais específicas do contexto.

BMP-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BMP10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BMP-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BMP10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BMP10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BMP-10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BMP10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BMP-10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BMP-10 em células tumorais com expressão de BMP10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.