Plasmide CRISPR d'Activation (h) BMP-1: sc-402432-ACT

BMP1 code pour la protéine morphogénétique osseuse 1 (BMP-1), une métalloprotéase sécrétée de la famille des astacines qui favorise la maturation de la matrice extracellulaire (MEC) en traitant protéolytiquement les procollagènes et en activant des facteurs associés à la matrice. Par des événements de clivage qui soutiennent la fibrillogenèse du collagène et l’organisation de la membrane basale, BMP-1 contribue à l’architecture du tissu conjonctif, au remodelage tissulaire et au renouvellement de la MEC associé à la réparation des plaies. L’activité de BMP-1 recoupe fonctionnellement les voies de signalisation du TGF-β et les voies matricellulaires en modulant la disponibilité et l’état d’activation de facteurs de croissance et de composants structuraux liés à la MEC. Une dérégulation de l’expression de BMP1 ou de l’activité de sa protéase a été impliquée dans le remodelage fibrotique et dans des phénotypes héréditaires du tissu conjonctif caractérisés par une altération du processing du collagène.

BMP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BMP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BMP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BMP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BMP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BMP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BMP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BMP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BMP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de BMP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.