BMCP1 (UCP5) Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405051

Descripción general

SLC25A14 codifica BMCP1 (UCP5), un transportador de la membrana interna mitocondrial perteneciente a la familia de las proteínas desacoplantes, que modula la conductancia de protones y el potencial de membrana mitocondrial, influyendo así en la eficiencia de la fosforilación oxidativa y en el equilibrio energético celular. La actividad de UCP5 afecta la generación mitocondrial de especies reactivas de oxígeno, el manejo del calcio y la susceptibilidad a la disfunción mitocondrial inducida por estrés, lo que la vincula con la homeostasis redox y la bioenergética neuronal. Su expresión está enriquecida en contextos del sistema nervioso, y la alteración de la regulación de UCP5 se ha investigado en mecanismos relevantes para la neurodegeneración, el estrés metabólico y los trastornos mitocondriales, donde se ven alteradas la eficiencia del acoplamiento y el estrés oxidativo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO BMCP1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC25A14 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC25A14 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC25A14 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína BMCP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC25A14 para la investigación de la señalización de BMCP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC25A14 críticos para la función de BMCP1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC25A14 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido BMCP1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido BMCP1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC25A14. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR BMCP1 (h) y el plásmido HDR BMCP1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC25A14 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC25A14 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.