Plásmido CRISPR de Activación (m) BMAL2: sc-435462-ACT

Arntl2 codifica el factor de transcripción BMAL2, de tipo hélice-bucle-hélice básico con dominio PAS, un regulador central de los programas transcripcionales circadianos que forma heterodímeros con CLOCK/NPAS2 para impulsar la expresión génica dependiente de E-box. En células de ratón, BMAL2 contribuye al control rítmico del metabolismo, la función mitocondrial, las respuestas al daño del ADN y la señalización inmunitaria a través de redes reguladas por el reloj. Las señales temporales mediadas por Arntl2 se intersectan con vías como la señalización MAPK y NF-κB y modulan las transiciones de estado celular bajo estrés. La actividad desregulada de ARNTL2/BMAL2 se ha asociado con una homeostasis circadiana alterada y se ha estudiado en contextos que incluyen inflamación, disfunción metabólica y fenotipos asociados a tumores.

BMAL2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Arntl2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BMAL2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Arntl2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Arntl2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BMAL2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Arntl2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BMAL2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BMAL2 en células tumorales con expresión de Arntl2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.