Bim_EL CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400515-ACT

BCL2L11 kodiert Bim, ein ausschließlich BH3-haltiges proapoptotisches Mitglied der BCL-2-Familie, das zelluläre Stresssignale mit der Permeabilisierung der äußeren Mitochondrienmembran und der Aktivierung von Caspasen verknüpft. Die Isoform Bim_EL ist eine wesentliche, durch Phosphorylierung regulierte Form, die Signale aus den MAPK/ERK-, JNK- und PI3K/AKT-Signalwegen integriert, um Apoptose, Anoikis und die Homöostase von Immunzellen fein abzustimmen. Durch die Antagonisierung antiapoptotischer BCL-2-Proteine und die Aktivierung von BAX/BAK trägt Bim dazu bei, das Zellschicksal bei Entzug von Wachstumsfaktoren, ER-Stress und Störungen des Zytoskeletts zu bestimmen. Eine dysregulierte BCL2L11-Expression oder -Signalwegkontrolle wird mit dem Überleben von Krebszellen, Mechanismen der Therapieresistenz und immunbezogener Pathobiologie in Verbindung gebracht und macht BCL2L11 zu einem zentralen Knotenpunkt für die Forschung zu Apoptose und Stressantworten.

BimEL Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BCL2L11-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BimEL Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BCL2L11-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BCL2L11-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BimEL-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BCL2L11-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BimEL-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BimEL-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BCL2L11-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.