Biglycan CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401408-ACT

BGN kodiert Biglycan, ein sezerniertes, kleines leucinreiches Proteoglykan, das an Kollagene bindet und den Aufbau der extrazellulären Matrix (ECM), die Gewebemechanik sowie perizelluläre Signalprozesse in Bindegeweben reguliert. Biglycan beeinflusst die Verfügbarkeit von Wachstumsfaktoren und die Rezeptorsignalübertragung und greift dabei in Signalwege wie TGF-β/SMAD, Wnt/β-Catenin und integrinvermittelte Adhäsion ein, wodurch Zellproliferation, Migration und Entzündungsreaktionen mitgesteuert werden. In der Humanbiologie sind veränderte BGN-Expression und ECM-Remodelling häufig mit fibrotischen Prozessen, Tumor–Stroma-Interaktionen sowie vaskulären und muskuloskelettalen Pathophysiologien assoziiert, was BGN zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung matrixgetriebener Signalgebung macht. Seine Rollen bei der Aktivierung der angeborenen Immunantwort und der Zytokinregulation unterstützen zudem mechanistische Untersuchungen zur entzündungsgekoppelten Gewebeumgestaltung.

Biglycan Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BGN-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Biglycan Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BGN-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BGN-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Biglycan-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BGN-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Biglycan-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Biglycan-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BGN-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.