beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-419239-LAC

Atp1b3 codifica a subunidade β3 da Na⁺/K⁺-ATPase, um complexo enzimático essencial da membrana plasmática que mantém os gradientes eletroquímicos de Na⁺ e K⁺ necessários para o potencial de membrana, a homeostase osmótica e o transporte ativo secundário. Ao sustentar processos dependentes de íons, a ATP1B3 influencia a excitabilidade celular, a captação de nutrientes, a regulação de volume e vias de sinalização ligadas à polaridade epitelial e à ativação de células imunes. Alterações na composição ou na expressão das subunidades da Na⁺/K⁺-ATPase têm sido associadas à disfunção de barreira, sinalização inflamatória aberrante e respostas ao estresse relevantes para a biologia de doenças cardiovasculares, neurológicas e metabólicas. Em modelos murinos, a modulação da expressão de Atp1b3 pode ajudar a dissecar como a maquinaria de transporte iônico coordena a fisiologia dos tecidos e as respostas a lesão ou inflamação.

As Partículas de Ativação Lentivirais beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Atp1b3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Atp1b3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de beta 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1B3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Atp1b3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.