Plasmide Double Nickase (h) BDNF: sc-400029-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BDNF correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BDNF Double Nickase (h) et le plasmide BDNF Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BDNF. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: pro BDNF Antibody (5H8): sc-65514
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BDNF | sc-400029-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BDNF | sc-400029-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le facteur neurotrophique dérivé du cerveau (BDNF) est une neurotrophine sécrétée qui transmet ses signaux principalement via NTRK2/TrkB et p75NTR afin de réguler la survie et la différenciation neuronales, la plasticité synaptique et le remodelage des circuits dépendant de l’activité. La signalisation induite par le BDNF mobilise les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT et PLCγ, influençant la croissance des neurites, la potentialisation à long terme et des programmes transcriptionnels liés à l’apprentissage et à la mémoire. Des altérations de l’expression du BDNF ou de sa signalisation ont été associées à des mécanismes de maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives, notamment la réactivité au stress, la régulation de l’humeur et une altération de la fonction synaptique. Au-delà du système nerveux, le BDNF est également étudié dans le cadre des interactions neuro-immunes et de la régulation du métabolisme, ce qui en fait un outil largement utile dans des modèles de recherche mécanistique.
BDNF Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BDNF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BDNF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BDNF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BDNF.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.