Plasmide Double Nickase (h) BDH1: sc-405825-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) BDH1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide BDH1 Double Nickase (h) et le plasmide BDH1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant BDH1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: BDH1 Antibody (G-5): sc-514413
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) BDH1 | sc-405825-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) BDH1 | sc-405825-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BDH1 code la 3‑hydroxybutyrate déshydrogénase mitochondriale 1, une enzyme NAD+/NADH‑dépendante qui catalyse l’interconversion de l’acétoacétate et du D‑β‑hydroxybutyrate dans le métabolisme des corps cétoniques. En régulant l’équilibre rédox cellulaire et l’utilisation des cétones, BDH1 relie la disponibilité des nutriments à la production d’énergie mitochondriale et à l’apport en acétyl‑CoA pour les processus biosynthétiques et de signalisation en aval. L’activité de BDH1 est donc pertinente pour la flexibilité métabolique des tissus, en particulier en conditions de jeûne, de régime riche en lipides ou d’hypoxie, qui déplacent la dépendance vers les corps cétoniques. Des altérations de l’expression ou de la fonction de BDH1 ont été étudiées dans des contextes de dérégulation métabolique et de métabolisme tumoral, où le remodelage des voies mitochondriales et de l’homéostasie rédox peut influencer le phénotype cellulaire.
BDH1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BDH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BDH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BDH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BDH1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.