Plásmido CRISPR de Activación (h) BCoR: sc-409976-ACT

BCOR (correpresor central de BCL6) codifica BCoR, un correagulador nuclear de la transcripción que se asocia con factores de transcripción específicos de secuencia y con modificadores epigenéticos para coordinar la represión génica durante el desarrollo y el compromiso de linaje. BCoR actúa dentro de complejos represores Polycomb no canónicos, conectando factores de unión al ADN con programas de remodelación de la cromatina y de modificación de histonas que determinan la identidad celular y la diferenciación. La alteración o desregulación de BCOR se ha asociado con un control transcripcional anómalo en contextos hematopoyéticos y mesenquimales, y se ha implicado de forma recurrente en múltiples tipos de tumores y trastornos del desarrollo. Como correpresor asociado a la cromatina, BCoR se estudia con frecuencia por su papel en redes transcripcionales, transiciones del destino celular y estabilidad epigenética.

BCoR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BCOR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BCoR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BCOR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BCOR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BCoR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BCOR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BCoR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BCoR en células tumorales con expresión de BCOR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.