Plásmido CRISPR de Activación (m) BCLAF1: sc-428381-ACT

El gen BCLAF1 de ratón (Bclaf1) codifica BCLAF1, un factor nuclear de unión a ADN/ARN que integra el control transcripcional con el empalme (splicing) del pre-ARNm y la expresión génica sensible al estrés. Se ha vinculado con la regulación de la apoptosis y de programas asociados a la autofagia, y participa en procesos asociados a la cromatina que moldean la progresión del ciclo celular y las respuestas al daño del ADN. A través de estas actividades, BCLAF1 influye en decisiones del destino celular en contextos inmunitarios y epiteliales, y se estudia con frecuencia en vías relevantes para la transformación oncogénica y la señalización inflamatoria. La desregulación de las redes transcripcionales y de procesamiento de ARN dependientes de BCLAF1 se ha asociado con alteraciones de la señalización de supervivencia y con fenotipos de estabilidad genómica en modelos relevantes de enfermedad.

BCLAF1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Bclaf1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BCLAF1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Bclaf1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Bclaf1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BCLAF1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Bclaf1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BCLAF1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BCLAF1 en células tumorales con expresión de Bclaf1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.