Plásmido CRISPR de Activación (h) Bcl-x_S/L: sc-400170-ACT

BCL2L1 codifica las isoformas proteicas Bcl-xS/L, reguladores centrales de la apoptosis mitocondrial que modulan la permeabilización de la membrana externa mediante interacciones con miembros de la familia BCL2 como BAX y BAK. El empalme alternativo genera Bcl-xL antiapoptótica y Bcl-xS proapoptótica, lo que vincula a BCL2L1 con decisiones de destino celular durante el desarrollo, la homeostasis inmunitaria y las respuestas al estrés celular. La actividad de BCL2L1 integra señales de vías de factores de crecimiento y de estrés, influyendo en la activación de caspasas, la integridad mitocondrial y la supervivencia ante desafíos genotóxicos o metabólicos. La expresión desregulada de BCL2L1 y el equilibrio entre isoformas se estudian con frecuencia en la supervivencia de células cancerosas, los mecanismos de resistencia a terapias y modelos relevantes para la neurodegeneración de vulnerabilidad apoptótica.

Bcl-xS/L El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BCL2L1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Bcl-xS/L El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BCL2L1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BCL2L1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Bcl-xS/L. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BCL2L1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Bcl-xS/L en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Bcl-xS/L en células tumorales con expresión de BCL2L1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.