Plasmide Double Nickase (h) Bcl-w: sc-402639-NIC

BCL2L2 code la protéine anti‑apoptotique Bcl‑w de la famille Bcl‑2, un régulateur de l’apoptose intrinsèque situé sur la membrane externe mitochondriale, qui limite la libération du cytochrome c en s’opposant aux protéines BH3‑only pro‑apoptotiques et en restreignant la formation de pores par BAX/BAK. En contrôlant l’intégrité mitochondriale, Bcl‑w module les seuils d’activation des caspases et intègre des signaux de survie en aval des réponses au stress cellulaire, de la privation de facteurs de croissance et des perturbations métaboliques. Des altérations de l’expression de BCL2L2 ont été associées à une dérégulation des programmes de survie cellulaire en cancérologie, et le gène a aussi été étudié dans des contextes tels que la viabilité neuronale et le maintien des cellules germinales, où la sensibilité à l’apoptose façonne l’homéostasie tissulaire. Ces fonctions font de BCL2L2 une cible utile pour disséquer les circuits mitochondriaux de l’apoptose, l’adaptation au stress et les interactions entre voies, notamment avec les signalisations MAPK et PI3K–AKT.

Bcl-w Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BCL2L2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BCL2L2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BCL2L2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BCL2L2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.