BBS4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403421-ACT

BBS4 codifica um componente central do BBSoma, um complexo multiproteico que medeia o tráfego de receptores de membrana e proteínas de sinalização para e a partir do cílio primário. Ao coordenar o transporte intraflagelar e a composição da membrana ciliar, o BBS4 sustenta a ciliogênese e regula vias dependentes de cílios, incluindo Hedgehog e outras redes de sinalização ligadas a GPCR. A disrupção de BBS4 perturba a dinâmica de sinalização ciliar e a homeostase celular em tecidos ciliados. Variantes em BBS4 estão associadas à síndrome de Bardet–Biedl, relacionando o transporte ciliar alterado a fenótipos multissistêmicos relevantes para pesquisas em neurodesenvolvimento e biologia metabólica e sensorial.

BBS4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BBS4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BBS4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BBS4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BBS4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BBS4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BBS4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BBS4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BBS4 em células tumorais com expressão de BBS4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.