BBS1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-410535-NIC

BBS1はBBSome（BBSソーム）を構成する中核サブユニットの一つをコードしており、BBSomeはIFT（intraflagellar transport：鞭毛内輸送）機構と協調して、一次繊毛の膜タンパク質の輸送ならびに一次繊毛のシグナル伝達能（シグナル伝達が可能な状態）の制御を担う多タンパク質複合体である。受容体の局在やターンオーバーを制御することにより、BBS1はHedgehog経路やGPCR（Gタンパク質共役受容体）介在性シグナル伝達など、繊毛依存的な経路に影響を及ぼし、その下流で細胞恒常性、神経内分泌調節、発生に関わる作用を引き起こす。BBS1の機能が破綻すると、繊毛形成（ciliogenesis）とカーゴの選別が障害され、シグナル伝達の変化や繊毛組成の異常につながる。ヒトBBS1の変異はバルデー・ビードル症候群（Bardet–Biedl syndrome）および関連する繊毛病（ciliopathy）と強く関連しており、繊毛関連疾患の機序を研究するうえで本遺伝子が広範な重要性を持つことを裏づけている。

BBS1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における BBS1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、BBS1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、BBS1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、BBS1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。