Plasmide CRISPR d'Activation (m) BAZ2B: sc-436575-ACT

Le gène murin *Baz2b* code BAZ2B, un régulateur de la chromatine contenant un bromodomaine, qui reconnaît les marques d’acétyl-lysine sur les histones et contribue à coordonner le remodelage des nucléosomes ainsi que le contrôle de la transcription. Par son rôle dans l’accessibilité de la chromatine et la régulation épigénétique, BAZ2B peut influencer les programmes génétiques du développement, le maintien de l’identité cellulaire et les réseaux transcriptionnels répondant aux stimuli. Des altérations de la signalisation médiée par les bromodomaines et un remodelage de la chromatine dérégulé sont largement associés à des mécanismes pertinents pour le neurodéveloppement, l’homéostasie métabolique et des états transcriptionnels oncogéniques, ce qui fait de *Baz2b* un nœud utile pour explorer les interactions entre voies épigénétiques. La modulation expérimentale de l’expression de *Baz2b* soutient des études de la fonction des promoteurs/activateurs, de la transcription dépendante de la chromatine et du remodelage des réseaux de gènes dans des systèmes mammifères.

BAZ2B Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Baz2b sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BAZ2B Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Baz2b dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Baz2b, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BAZ2B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Baz2b natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BAZ2B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BAZ2B dans les cellules tumorales présentant une expression de Baz2b silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.