Plásmido CRISPR de Activación (h) BAZ2B: sc-407635-ACT

BAZ2B (proteína 2B con dominio adyacente a bromodominio y dedo de zinc) es un regulador asociado a la cromatina que se une a histonas acetiladas a través de su bromodominio y contribuye a la remodelación de nucleosomas y al control transcripcional. Al coordinar la accesibilidad de la cromatina, BAZ2B influye en programas de expresión génica dependientes de la ARN polimerasa II implicados en la identidad celular, la proliferación y la diferenciación. La actividad alterada de lectores de cromatina y las redes transcripcionales desreguladas son rasgos recurrentes del cáncer y de fenotipos del neurodesarrollo, lo que convierte a BAZ2B en un nodo útil para estudiar perturbaciones de las vías epigenéticas. Investigar la función de BAZ2B respalda estudios mecanísticos sobre la señalización de la acetilación de histonas, la dinámica de la remodelación de la cromatina y la regulación génica específica del contexto.

BAZ2B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BAZ2B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BAZ2B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BAZ2B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BAZ2B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BAZ2B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BAZ2B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BAZ2B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BAZ2B en células tumorales con expresión de BAZ2B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.