bassoon Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406918

Descripción general

BSN codifica bassoon, una gran proteína de andamiaje de la citomatriz presináptica que organiza la zona activa y favorece una liberación eficiente de neurotransmisores. Bassoon contribuye al acoplamiento y “primado” (preparación) de las vesículas sinápticas, conectando los reservorios de vesículas con la entrada de Ca²⁺ mediada por canales dependientes de voltaje y coordinando interacciones con otros componentes de la zona activa durante la sinaptogénesis y el mantenimiento sináptico. Por su papel en el ensamblaje presináptico y en la dinámica del ciclo vesicular, BSN se estudia en vías que regulan la conectividad neuronal, la plasticidad sináptica y la neurotransmisión dependiente de la actividad. Las alteraciones en la organización sináptica asociada a bassoon se han investigado en el contexto de mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neuropsiquiátricas, donde la disfunción presináptica es un fenotipo celular frecuente.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO bassoon (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen BSN en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del BSN junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de BSN tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína bassoon.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en BSN para la investigación de la señalización de bassoon, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de BSN críticos para la función de bassoon
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de BSN para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido bassoon CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido bassoon CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus BSN. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR bassoon (h) y el plásmido HDR bassoon (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología BSN para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana BSN definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.