Plasmide Double Nickase (h) basonuclin: sc-405917-NIC

BNC1 code la basonucline, un facteur de transcription à doigts de zinc enrichi dans les épithéliums stratifiés et certains types cellulaires associés à la lignée germinale, où il soutient des programmes liés à la prolifération et à la différenciation. La basonucline se localise dans le noyau et a été impliquée dans la régulation de la transcription de l’ARN ribosomique ainsi que de réseaux plus larges d’expression génique qui influencent la croissance des kératinocytes et l’homéostasie tissulaire. Par ces fonctions transcriptionnelles, BNC1 s’inscrit à l’interface de voies contrôlant la progression du cycle cellulaire, l’état de la chromatine et la maturation épithéliale. Une expression altérée de BNC1 ou son silence épigénétique a été rapporté dans de multiples contextes tumoraux, ce qui en fait un locus utile pour étudier la dérégulation transcriptionnelle dans des modèles liés au cancer.

basonuclin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus BNC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de BNC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de BNC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de BNC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.