Particules Lentivirales d'Activation (h) BAP31: sc-402421-LAC

BCAP31 code pour BAP31, un chaperon membranaire intégral du réticulum endoplasmique (RE) qui coordonne la biogenèse des protéines membranaires, le contrôle qualité du RE et le trafic vésiculaire entre le RE et l’appareil de Golgi. BAP31 participe à la prise en charge et à l’export de protéines clientes naissantes et relie l’homéostasie du RE à la signalisation apoptotique via des interactions qui influencent l’activation des caspases et les voies mitochondriales. Par ses rôles dans la protéostasie et le transport intracellulaire, BCAP31 est fréquemment étudié dans le contexte des réponses au stress cellulaire, de la signalisation liée au système immunitaire et de la mort cellulaire régulée. La dérégulation des processus de repliement et de trafic associés au RE impliquant BAP31 a été associée à des états physiopathologiques où le stress protéotoxique et une apoptose aberrante sont en cause.

Les particules d'activation lentivirales BAP31 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de BCAP31 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BAP31 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription BCAP31, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de BAP31. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif BCAP31 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.