Plásmido CRISPR de Activación (h) Bag-3: sc-402929-ACT

BAG3 (Bag-3) es un cocochaperón inducible por estrés que se une a HSP70/HSC70 para coordinar el control de calidad proteica, equilibrando la proteostasis, la autofagia y la apoptosis en células humanas. Favorece la autofagia selectiva asistida por chaperonas e influye en la organización del citoesqueleto, la adhesión celular y la mecanotransducción, especialmente bajo estrés proteotóxico u oxidativo. A través de estas funciones, BAG3 contribuye a la regulación de las vías de supervivencia celular y al recambio de proteínas dañadas o propensas a agregarse. La expresión o la función desregulada de BAG3 se ha vinculado con miocardiopatías y trastornos neuromusculares, y se estudia con frecuencia en el contexto de la adaptación de las células tumorales al estrés y la resistencia al estrés proteotóxico.

Bag-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BAG3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Bag-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BAG3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BAG3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Bag-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BAG3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Bag-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Bag-3 en células tumorales con expresión de BAG3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.