BAF53B Double Nickase Plasmid (h): sc-409940-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das BAF53B Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- BAF53B Double-Nickase-Plasmid (h) und BAF53B Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACTL6B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
BAF53B Double Nickase Plasmid (h) | sc-409940-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BAF53B Double Nickase Plasmid (h2) | sc-409940-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane ACTL6B kodiert BAF53B, eine aktinverwandte Untereinheit der neuronenspezifisch angereicherten, ATP-abhängigen SWI/SNF-(BAF)-Chromatin-Remodelling-Komplexe, die während der Neuroentwicklung die Nukleosomenpositionierung und Transkriptionsprogramme regulieren. BAF53B trägt zur aktivitätsabhängigen Genexpression, zur neuronalen Differenzierung und zur synaptischen Plastizität bei, indem es die Chromatinzugänglichkeit mit der Belegung durch Transkriptionsfaktoren koordiniert. Über seine Rolle beim Zusammenbau und der Zielsteuerung des BAF-Komplexes verknüpft ACTL6B epigenetische Regulation mit Signalwegen, die die neuronale Reifung und die Ausbildung neuronaler Schaltkreise steuern. Eine Fehlregulation von BAF-Komplexkomponenten und des neuronalen Chromatin-Remodellings ist an Mechanismen neuroentwicklungsbedingter und neuropsychiatrischer Erkrankungen beteiligt, wodurch ACTL6B ein nützlicher Genort ist, um Gen–Chromatin-Beziehungen in hirnrelevanten Modellen zu untersuchen.
BAF53B Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACTL6B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACTL6B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACTL6B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACTL6B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.