BACE2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425013

Descripción general

Bace2 codifica la enzima 2 de corte de APP en el sitio β del ratón (BACE2), una proteasa aspártica transmembrana de tipo I que participa en la proteólisis intramembrana regulada de sustratos selectos en las vías secretora y endosomal. La actividad de BACE2 influye en la proteostasis y en el procesamiento de proteínas de membrana, y se relaciona con el tráfico vesicular, el recambio lisosomal y las respuestas de estrés celular vinculadas a la fisiología neuronal y metabólica. En el sistema nervioso central, BACE2 se ha estudiado en el contexto del procesamiento de la familia de proteínas precursoras del amiloide y la generación de péptidos, aportando información para la investigación de vías implicadas en la neurodegeneración. En tejidos periféricos, incluidos los islotes pancreáticos, el corte de sustratos asociado a BACE2 se ha relacionado con la función de las células β, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos sobre la biología de las enfermedades metabólicas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO BACE2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Bace2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Bace2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Bace2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína BACE2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Bace2 para la investigación de la señalización de BACE2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Bace2 críticos para la función de BACE2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Bace2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido BACE2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido BACE2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Bace2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR BACE2 (m) y el plásmido HDR BACE2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Bace2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Bace2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.