BACE2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403147-ACT

BACE2 (Beta-Site-APP-spaltendes Enzym 2) ist eine Typ‑I-Transmembran-Aspartylprotease, die an der regulierten intramembranären Proteolyse beteiligt ist und den Transport sowie den Umsatz ausgewählter Membranproteine beeinflusst. In menschlichen Zellen wurde BACE2 mit Proteostase‑Signalwegen in Verbindung gebracht, die endosomal‑lysosomale Verarbeitung und die Dynamik sekretorischer Kompartimente umfassen, mit funktionellen Verknüpfungen zur Verarbeitung der Amyloid‑Vorläuferprotein‑Familie und breiteren, substratabhängigen Effekten auf Signalwege. Seine Expression und Aktivität wurden unter anderem im Kontext der Neurobiologie und der metabolischen Regulation untersucht, wo eine veränderte proteasevermittelte Verarbeitung die zelluläre Homöostase stören kann. Diese Eigenschaften machen BACE2 zu einem nützlichen Ziel, um proteasegetriebenes Netzwerk‑Remodeling und Signalweg‑Crosstalk in krankheitsrelevanten Modellsystemen zu untersuchen.

BACE2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen BACE2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BACE2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des BACE2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der BACE2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BACE2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native BACE2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BACE2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BACE2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem BACE2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.