B7RP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-424469-ACT

O gene murino *Icosl* codifica o ligante coestimulatório B7RP-1 (ICOSL/CD275), membro da superfamília das imunoglobulinas, expresso em células apresentadoras de antígeno e em alguns compartimentos estromais não hematopoéticos. A ligação do ICOS em células T ativadas promove sinalização dependente de PI3K, que sustenta a diferenciação de células T auxiliares foliculares (Tfh), as reações de centro germinativo e a produção de anticorpos com troca de classe, conectando o ICOSL à regulação da polarização imune adaptativa. A comunicação mediada por ICOSL também influencia redes de citocinas que moldam o equilíbrio Th1/Th2/Th17 e o tráfego de células imunes dentro de tecidos linfoides. A desregulação da sinalização ICOS–ICOSL é frequentemente estudada em modelos de autoimunidade, inflamação crônica, alergia e modulação imune associada a tumores, nos quais a coestimulação alterada pode deslocar as respostas imunes humorais e celulares.

B7RP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Icosl sem alterar a sequência de ADN subjacente.

B7RP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Icosl em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Icosl, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de B7RP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Icosl nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de B7RP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via B7RP-1 em células tumorais com expressão de Icosl silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.