B7-H3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402032-ACT

CD276 codifica a glicoproteína imunorreguladora B7-H3, um membro da família B7 amplamente implicado na modulação, na superfície celular, da atividade de células T e de células NK. A B7-H3 participa de sinalização imunorregulatória que molda a produção de citocinas, as interações com células apresentadoras de antígeno e programas de evasão imune no microambiente tumoral. Foi relatado aumento da expressão de B7-H3 em múltiplas neoplasias malignas e, com frequência, isso se associa a fenótipos invasivos, sinalização inflamatória alterada e remodelamento do diálogo entre estroma e sistema imune. Essas propriedades tornam o CD276 um alvo molecular útil para estudar a biologia de checkpoints imunológicos, estados transcricionais associados ao interferon e a imunossupressão relacionada ao câncer.

B7-H3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD276 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

B7-H3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD276 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD276, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de B7-H3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD276 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de B7-H3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via B7-H3 em células tumorais com expressão de CD276 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.