B7-H3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402032-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- B7-H3 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- B7-H3 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal B7-H3 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal B7-H3 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di CD276. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: B7-H3 Antibody (F-11): sc-376769
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
B7-H3 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-402032-ACT | 20 µg | $397.00 |
CD276 codifica la glicoproteina immunoregolatoria B7-H3, un membro della famiglia B7 ampiamente implicato nella modulazione, sulla superficie cellulare, dell’attività delle cellule T e delle cellule NK. B7-H3 partecipa a segnali immunoregolatori che modellano la produzione di citochine, le interazioni con le cellule presentanti l’antigene e i programmi di evasione immunitaria all’interno del microambiente tumorale. Un’espressione elevata di B7-H3 è stata riportata in molteplici neoplasie ed è spesso associata a fenotipi invasivi, a una segnalazione infiammatoria alterata e al rimodellamento del crosstalk tra stroma e comparto immunitario. Queste proprietà rendono CD276 un utile bersaglio molecolare per studiare la biologia dei checkpoint immunitari, gli stati trascrizionali associati all’interferone e l’immunosoppressione legata al cancro.
B7-H3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD276 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
B7-H3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD276 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD276, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di B7-H3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD276 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da B7-H3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via B7-H3 nelle cellule tumorali con espressione di CD276 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.