Plásmido CRISPR de Activación (h) B7-H3: sc-402032-ACT

CD276 codifica la glicoproteína inmunorreguladora B7-H3, un miembro de la familia B7 ampliamente implicado en la modulación, en la superficie celular, de la actividad de los linfocitos T y de las células NK. B7-H3 participa en señales inmunorreguladoras que moldean la producción de citocinas, las interacciones con las células presentadoras de antígeno y los programas de evasión inmunitaria dentro del microambiente tumoral. Se ha reportado una expresión elevada de B7-H3 en múltiples neoplasias malignas y con frecuencia se asocia con fenotipos invasivos, señalización inflamatoria alterada y remodelación del diálogo entre estroma e inmunidad. Estas propiedades hacen de CD276 una diana molecular útil para estudiar la biología de los puntos de control inmunitarios, los estados transcripcionales asociados al interferón y la inmunosupresión vinculada al cáncer.

B7-H3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD276 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

B7-H3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD276 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD276, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de B7-H3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD276 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de B7-H3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía B7-H3 en células tumorales con expresión de CD276 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.