Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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B7-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-418032-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das B7-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- B7-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und B7-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CD86 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: B7-2: sc-28347
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
B7-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-418032-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
B7-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418032-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD86 (B7-2) ist ein kostimulatorischer, immunregulatorischer Ligand, der vor allem auf antigenpräsentierenden Zellen exprimiert wird und an CD28 sowie CTLA-4 bindet, um die T‑Zell-Aktivierung, Anergie und das Gleichgewicht von Immuncheckpoints zu modulieren. In Verbindung mit der TCR-Signalübertragung trägt CD86 zur Bildung der immunologischen Synapse und zur Aktivierung nachgeschalteter Signalwege wie NF‑κB, MAPK und PI3K/AKT bei und prägt dadurch die Zytokinproduktion sowie die adaptive Immunpriming‑Antwort. Eine veränderte CD86-Expression wurde in entzündlichen und autoimmunen Kontexten sowie in Tumor‑Immun‑Mikroumgebungen beschrieben, wo sie die Antigenpräsentation und die Stärke lymphozytärer Antworten beeinflussen kann. Daher wird CD86 häufig in Assays zur Reifung dendritischer Zellen, zur Makrophagenpolarisierung und zur Dynamik der T‑Zell‑Kostimulation untersucht.
B7-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CD86-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CD86 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CD86-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CD86-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.