B7-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401971-ACT

O CD80 humano (B7-1) é um ligante coestimulador da superfamília das imunoglobulinas expresso principalmente em células apresentadoras de antígeno, onde se liga ao CD28 e ao CTLA-4 em células T para modular a ativação, a proliferação e a produção de citocinas. Ao moldar a formação da sinapse imunológica e integrar sinais que complementam o engajamento do TCR, o B7-1 influencia vias a jusante que controlam a diferenciação efetora e a tolerância periférica. A expressão desregulada de CD80 está implicada na ativação imune aberrante e em mecanismos de tolerância comprometidos observados em diversas doenças autoimunes e inflamatórias, e é frequentemente avaliada em imunologia de tumores como um determinante da capacidade de apresentação de antígenos. In vitro, o CD80 serve como um marcador-chave e nó funcional em estudos de maturação de células dendríticas, polarização de macrófagos e priming de células T.

B7-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD80 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

B7-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD80 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD80, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de B7-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD80 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de B7-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via B7-1 em células tumorais com expressão de CD80 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.