Particules Lentivirales d'Activation (h) Autotaxin: sc-401889-LAC

ENPP2 code l’autotaxine, une lysophospholipase D sécrétée qui convertit la lysophosphatidylcholine en acide lysophosphatidique (LPA), un médiateur lipidique bioactif qui transmet des signaux via les récepteurs du LPA pour réguler la migration et la survie cellulaires, le remodelage du cytosquelette, ainsi que la dynamique vasculaire et celle des cellules immunitaires. La signalisation autotaxine–LPA s’intègre à des voies pilotées par des GPCR, notamment Rho/ROCK, PI3K–AKT, MAPK/ERK et les programmes transcriptionnels YAP/TAZ, modulant les interactions avec la matrice extracellulaire et les signaux inflammatoires. Une expression dérégulée d’ENPP2 et une activité accrue de l’autotaxine ont été associées à la fibrose, à l’inflammation chronique et au remodelage du microenvironnement tumoral dans de multiples contextes tissulaires. En conséquence, ENPP2 est largement étudié dans la signalisation lipidique, le dialogue stroma–système immunitaire, les processus liés à l’angiogenèse et les mécanismes du comportement cellulaire invasif.

Les particules d'activation lentivirales Autotaxin (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ENPP2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Autotaxin (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ENPP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Autotaxin. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ENPP2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.