AT_1a Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419048

Descripción general

Agtr1a codifica el receptor de angiotensina II tipo 1A del ratón (AT1a), un GPCR de siete dominios transmembrana que media la señalización de la angiotensina II en tejidos vasculares, renales, cardíacos y neurales. Tras la unión del ligando, AT1a se acopla principalmente a Gq/11 para activar la fosfolipasa C, elevar el Ca2+ intracelular y estimular la señalización dependiente de PKC, además de activar cascadas MAPK/ERK y vías asociadas a β-arrestina que influyen en programas transcripcionales. Este receptor integra las señales del sistema renina–angiotensina con procesos celulares que incluyen la regulación del tono vasomotor, el manejo de sodio y líquidos, las respuestas al estrés oxidativo y la señalización inflamatoria. La actividad desregulada de la vía de AT1a se utiliza ampliamente como eje mecanístico en modelos de hipertensión, hipertrofia y remodelado cardíacos, lesión renal y disfunción vascular, lo que convierte a Agtr1a en una diana habitual para el análisis de vías en biología cardiovascular y renal.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO AT1a (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Agtr1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Agtr1a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Agtr1a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AT1a.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Agtr1a para la investigación de la señalización de AT1a, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Agtr1a críticos para la función de AT1a
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Agtr1a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido AT1a CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido AT1a CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Agtr1a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AT1a (m) y el plásmido HDR AT1a (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Agtr1a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Agtr1a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.