ATP8A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406843

Übersicht

ATP8A1 kodiert eine P4-ATPase-Phospholipid-Flippase, die die Lipidasymmetrie der Plasmamembran aufrechterhält, indem sie Aminophospholipide wie Phosphatidylserin und Phosphatidylethanolamin zwischen den Membranblättern transloziert. Durch diese Aktivität unterstützt ATP8A1 Membrankrümmung, Vesikelabschnürung und endozytischen Transport und beeinflusst damit die Organisation des Zytoskeletts sowie polarisierte Membrandynamiken. Eine Störung der Lipidasymmetrie kann Signalplattformen und membranabhängige Prozesse verändern und verknüpft die Funktion von ATP8A1 mit Signalwegen, die den intrazellulären Transport und das Überleben der Zelle steuern. Eine Fehlregulation von ATP8A1 wurde im Zusammenhang mit neurologischen und metabolischen Phänotypen untersucht, bei denen Membranzusammensetzung und Trafficking entscheidende Determinanten der zellulären Homöostase sind.

Das ATP8A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ATP8A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ATP8A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ATP8A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ATP8A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ATP8A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ATP8A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ATP8A1-Exone abzielen, die für die ATP8A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ATP8A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ATP8A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ATP8A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ATP8A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ATP8A1 HDR-Plasmid (h) und ATP8A1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ATP8A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ATP8A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.