Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP13A3 (h): sc-413173

Présentation

ATP13A3 code une ATPase de type P5 impliquée dans l’homéostasie des cations et le trafic membranaire au sein du système endolysosomal, contribuant à la régulation du transport vésiculaire et à l’intégrité des compartiments intracellulaires. En influençant les gradients ioniques et la fonction des organites, ATP13A3 peut moduler les réponses au stress cellulaire, l’adaptation métabolique et des processus de signalisation liés à la dynamique des membranes. Une activité altérée d’ATP13A3 a été associée à la biologie cardiovasculaire et vasculaire pulmonaire, notamment via des liens génétiques rapportés dans l’hypertension artérielle pulmonaire, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude du remodelage vasculaire et de la fonction des cellules endothéliales. Son expression et son rôle supposé dans le maintien de l’homéostasie cellulaire en font également une cible pertinente pour explorer les mécanismes de prolifération, de survie et de signalisation dépendante du transport.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP13A3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ATP13A3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ATP13A3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ATP13A3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ATP13A3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ATP13A3 pour l'étude de la signalisation de ATP13A3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ATP13A3 essentiels à la fonction de ATP13A3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ATP13A3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ATP13A3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ATP13A3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ATP13A3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ATP13A3 plasmide HDR (h) et le ATP13A3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ATP13A3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ATP13A3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.