Plásmido Doble Nickase (h) ATIII: sc-403735-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ATIII consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ATIII (h) y el plásmido de doble nickasa ATIII (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SERPINC1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ATIII Anticuerpo (H-7): sc-271987
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ATIII | sc-403735-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ATIII | sc-403735-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SERPINC1 codifica la antitrombina III (ATIII), un inhibidor secretado de proteasas de serina que limita la coagulación al inactivar la trombina y factores activados como FXa y FIXa, cuya actividad se potencia por el sulfato de heparán y la heparina. ATIII es un regulador central de la hemostasia e interactúa con las cascadas de proteasas que controlan la formación de fibrina, la homeostasis endotelial y la señalización de la coagulación vinculada a la inflamación. La variación o la disminución de la actividad funcional de SERPINC1 se asocia con una coagulación desregulada y una predisposición trombótica, lo que lo convierte en un locus clave para estudiar el equilibrio de las vías anticoagulantes. Dado que la ATIII se produce principalmente en los hepatocitos y circula de forma sistémica, SERPINC1 también es relevante para investigar la biogénesis de proteínas secretadas y el control de proteasas extracelulares en el plasma.
ATIII El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SERPINC1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SERPINC1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SERPINC1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SERPINC1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.