Plasmide CRISPR/Cas9 KO Atg9a (m): sc-434176

Présentation

Atg9a code pour ATG9A, une protéine membranaire conservée à passages multiples qui circule entre le réseau trans-Golgi, les endosomes et les autophagosomes naissants afin d’assurer l’apport de membranes lors de la macroautophagie. Elle agit au sein de la machinerie centrale de l’autophagie en régulant l’expansion du phagophore et la biogenèse des autophagosomes, en intégrant des signaux issus des voies de détection des nutriments et de réponse au stress qui influencent le renouvellement lysosomal. Dans les modèles murins, la modification de l’activité d’Atg9a est utilisée pour étudier le contrôle, dépendant de l’autophagie, de la qualité des protéines et des organites, notamment la mitophagie et l’homéostasie du réticulum endoplasmique. Une autophagie associée à ATG9A dérégulée a été liée à la neurodégénérescence, à la biologie des infections et à des phénotypes inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du stress cellulaire et du maintien des tissus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Atg9a (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Atg9a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Atg9a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Atg9a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Atg9a.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Atg9a pour l'étude de la signalisation de Atg9a, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Atg9a essentiels à la fonction de Atg9a
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Atg9a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Atg9a plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Atg9a plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Atg9a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Atg9a plasmide HDR (m) et le Atg9a (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Atg9a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Atg9a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.