Atg3 Double Nickase Plasmid (h): sc-403308-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Atg3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Atg3 Double-Nickase-Plasmid (h) und Atg3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATG3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Atg3: sc-393660
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Atg3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403308-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Atg3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403308-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG3 kodiert Atg3, ein E2-ähnliches Enzym, das für die Autophagie essenziell ist und die Konjugation von Proteinen der LC3/ATG8-Familie an Phosphatidylethanolamin katalysiert. Dadurch werden die Expansion und Reifung der Autophagosomenmembran ermöglicht. Über seine Funktion in der ubiquitinähnlichen Konjugationskaskade ATG12–ATG5–ATG16L1 unterstützt ATG3 die zytoplasmatische Qualitätskontrolle, den Turnover von Organellen und die Anpassung an Nährstoffstress. Eine Störung des ATG3-abhängigen autophagischen Flusses kann Proteostase, mitochondriale Homöostase und angeborene Immun-Signalwege beeinflussen – Prozesse, die häufig mit Neurodegeneration, Infektionsbiologie und Stressantworten von Krebszellen in Verbindung stehen. Entsprechend ist ATG3 ein nützlicher Knotenpunkt zur Untersuchung selektiver Autophagie, lysosomenabhängigen Abbaus und zellulärer Überlebensprogramme unter metabolischem oder proteotoxischem Stress.
Atg3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATG3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATG3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATG3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATG3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.