Plasmide Double Nickase (h) ATF4: sc-400155-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ATF4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ATF4 Double Nickase (h) et le plasmide ATF4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ATF4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ATF4 Antibody (B-3): sc-390063
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ATF4 | sc-400155-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ATF4 | sc-400155-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le facteur de transcription activateur 4 (ATF4) est un facteur de transcription bZIP sensible au stress qui coordonne des programmes adaptatifs d’expression génique au cours de la réponse intégrée au stress (ISR). ATF4 est traduit de façon préférentielle après la phosphorylation d’eIF2α en aval de PERK, GCN2, PKR et HRI, ce qui active des réseaux transcriptionnels régulant le métabolisme des acides aminés, l’homéostasie rédox, l’autophagie et l’apoptose via des cibles impliquées dans la synthèse du glutathion, le métabolisme à un carbone et la protéostasie. Il s’interface avec le stress du réticulum endoplasmique (RE) et la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), notamment en coopération avec CHOP/DDIT3, afin d’orienter les décisions de destinée cellulaire en conditions de stress protéotoxique ou de carence nutritive. Une activité d’ATF4 dérégulée a été impliquée dans la survie des cellules cancéreuses en hypoxie et en situation de limitation nutritive, dans la neurodégénérescence et les troubles de la protéostasie, ainsi que dans des états métaboliques et inflammatoires où le contrôle transcriptionnel adaptatif au stress est altéré.
ATF4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ATF4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ATF4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ATF4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ATF4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.