ATF3 Double Nickase Plasmid (h): sc-416577-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ATF3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ATF3 Double-Nickase-Plasmid (h) und ATF3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATF3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ATF3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-416577-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATF3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416577-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATF3 (activating transcription factor 3) ist ein unmittelbarer Frühe‑Antwort‑, stressinduzierbarer bZIP-Transkriptionsfaktor, der vielfältige zelluläre Signale integriert, darunter MAPK/JNK‑, NF‑κB‑ und Signalwege der ungefalteten Proteinantwort (UPR). Durch die Bindung an CRE/ATF‑ähnliche Elemente und die Bildung von Homo‑ oder Heterodimeren mit Mitgliedern der AP‑1‑Familie moduliert ATF3 Transkriptionsprogramme, die Entzündung, Apoptose, Anpassungen des Zellzyklus und metabolische Umprogrammierung steuern. Seine Expression wird rasch durch DNA‑Schäden, oxidativen Stress, Zytokine und ER‑Stress induziert, wodurch ATF3 als zentraler Regulator adaptiver transkriptioneller Antworten positioniert ist. Eine fehlregulierte ATF3‑Aktivität wurde mit der Tumorbiologie, der Immun-Signalübertragung und Modellen von Gewebeschädigung in Verbindung gebracht, was ATF3 nützlich macht, um kontextabhängige Stress‑ und Entzündungsnetzwerke in menschlichen Zellen zu untersuchen.
ATF3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATF3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATF3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATF3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATF3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.