Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATF-5 (m): sc-430721
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- ATF-5 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique ATF-5, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ATF-5 Antibody (E-10): sc-377168
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATF-5 (m) | sc-430721 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le facteur de transcription activateur 5 (ATF-5), codé chez la souris par le gène *Atf5*, est un facteur de transcription de type basic leucine zipper (bZIP) qui régule des programmes d’expression génique contrôlant l’adaptation au stress cellulaire, la différenciation et la survie. ATF-5 participe à la signalisation de la réponse intégrée au stress et peut relayer des signaux en amont associés à eIF2α/ATF4 vers des sorties transcriptionnelles qui influencent la fonction mitochondriale et la protéostasie. Dans le système nerveux et d’autres tissus en développement, ATF-5 a été impliqué dans les décisions de lignée et le maintien d’états prolifératifs ou de type progéniteur via un contrôle transcriptionnel dépendant du contexte. Une activité d’ATF-5 dérégulée a été associée à une tolérance anormale au stress et à une altération des voies de survie cellulaire, ce qui souligne son intérêt pour des études mécanistiques portant sur le remodelage, lié aux maladies, des réseaux transcriptionnels.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ATF-5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Atf5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Atf5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Atf5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ATF-5.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Atf5 pour l'étude de la signalisation de ATF-5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Atf5 essentiels à la fonction de ATF-5
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Atf5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le ATF-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ATF-5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Atf5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le ATF-5 plasmide HDR (m) et le ATF-5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Atf5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Atf5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.