Plasmide CRISPR/Cas9 KO ATE1 (h): sc-405539

Présentation

ATE1 code l’arginyltransférase 1, une enzyme clé de la voie dite de la règle du N-end, qui ajoute après traduction de l’arginine aux extrémités N‑terminales des protéines, créant des dégrons qui orientent les substrats vers une dégradation protéasomale dépendante de l’ubiquitine. En régulant la stabilité des protéines, ATE1 influence la protéostasie, l’organisation du cytosquelette et la signalisation en réponse au stress, et a été associée au contrôle de la migration et de l’adhésion cellulaires via la modulation de protéines liées à l’actine. L’arginylation dépendante d’ATE1 contribue également à l’adaptation au stress mitochondrial et oxydatif en modulant l’abondance de certains régulateurs. La dérégulation des composants de la voie de la règle du N-end, dont ATE1, est associée à des altérations de l’homéostasie cellulaire pertinentes pour la biologie du cancer, la neurodégénérescence et des phénotypes développementaux dans des systèmes expérimentaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ATE1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ATE1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ATE1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ATE1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ATE1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ATE1 pour l'étude de la signalisation de ATE1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ATE1 essentiels à la fonction de ATE1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ATE1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ATE1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ATE1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ATE1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ATE1 plasmide HDR (h) et le ATE1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ATE1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ATE1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.