Asporin Lentiviral Activation Particles (m): sc-426152-LAC

Aspn kodiert Asporin, ein sezerniertes kleines leucinreiches Proteoglykan, das in der extrazellulären Matrix (ECM) angereichert ist und dort die Kollagenfibrillogenese sowie die Gewebebiomechanik moduliert. Asporin kann an Wachstumsfaktoren binden und deren Signalübertragung regulieren, einschließlich Signalwegen der TGF-β-Familie, und beeinflusst dadurch die Differenzierung von Chondrozyten, die Aktivierung von Fibroblasten und den Umbau der Matrix. In Mausmodellen wird eine veränderte Aspn-Expression häufig im Kontext der Knorpelhomöostase, der Skelettentwicklung und der Aufrechterhaltung des Bindegewebes untersucht. Eine dysregulierte ECM-Organisation und abnorme TGF-β-Signalgebung, die mit der Asporin-Biologie verknüpft sind, sind relevant für mechanistische Studien zu degenerativen Gelenkveränderungen, fibroseassoziiertem Remodeling und Tumor–Stroma-Interaktionen.

Asporin Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Aspn-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Asporin Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Aspn-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Asporin-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Aspn-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.