Plásmido CRISPR de Activación (m) Asporin: sc-426152-ACT

El gen Aspn de ratón codifica la asporina, un pequeño proteoglucano secretado rico en repeticiones de leucina, enriquecido en la matriz extracelular, donde modula la fibrilogénesis del colágeno y la organización de la matriz. La asporina regula la señalización célula–matriz e influye en vías clave como la señalización de TGF-β/SMAD y BMP, afectando la condrogénesis, la osteogénesis y la remodelación tisular. La alteración de la expresión de ASPN se ha asociado con fenotipos del tejido conectivo y del esqueleto, incluida la degeneración del cartílago relacionada con la osteoartritis y contextos de remodelación fibrótica. Estas propiedades hacen de Aspn un gen útil para estudiar la homeostasis de la matriz extracelular, la mecanotransducción y la regulación estromal del comportamiento celular.

Asporin El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Aspn sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Asporin El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Aspn en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Aspn, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Asporin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Aspn y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Asporin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Asporin en células tumorales con expresión de Aspn silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.