Plasmide Double Nickase (h) ASPH: sc-402938-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ASPH correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ASPH Double Nickase (h) et le plasmide ASPH Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ASPH. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ASPH Antibody (A-10): sc-271391
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ASPH | sc-402938-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ASPH | sc-402938-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ASPH (aspartate β-hydroxylase) code une dioxygénase dépendante du Fe(II) et du 2‑oxoglutarate, qui hydroxyle des résidus d’aspartate et d’asparagine au sein de domaines de type facteur de croissance épidermique (EGF) de certaines protéines. Par des modifications post‑traductionnelles de substrats extracellulaires et associés à la membrane, ASPH peut influencer les interactions protéine‑protéine et des processus de signalisation impliqués dans l’adhésion, la migration et la différenciation cellulaires, avec des liens rapportés avec la modulation de la voie Notch. Une expression dérégulée d’ASPH a été observée dans de multiples contextes tumoraux et fait fréquemment l’objet d’études en relation avec la croissance invasive et les phénotypes métastatiques. Au‑delà de la biologie du cancer, l’activité d’ASPH est également étudiée pour son impact plus large sur la maturation des protéines de la voie sécrétoire et sur les réseaux de signalisation à la surface cellulaire.
ASPH Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ASPH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ASPH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ASPH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ASPH.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.